هنبدأ الجزء بالجزء العامل الـ Experiment اللي هي
التجربة،أولا نحكي عن بعض المصطلحات الـ illusion
تحكينا هو عبارة عن الـ mobile phase تحكينا الـ
mobile phase ممكن أسميه solvent ممكن أسميه liquid
ممكن أسميه illusion، الـ illusion هي motion of
mobile phase through the stationary phase هي حركة
الـ mobile phase عبر الـ stationary phase لما يمشي
السائل اللي هو الـ mobile phase من الورقة اللي هي
الـ stationary phase هذه الحركة بسميها illusion، الـ
illusion time هو الوقت
اللذي يحتاجه الـ mobile phase للمرور عبر
الستشيراري phase اللي بيكون له شهر illusion time
فهو بيمر أسرع عبر الـ stationary phase اللي بيكون
وقته أقل، أخد واجهة أجال، إذا هو ماشي أسرع، الـ
illusion time هو الوقت اللي احتاجه الـ mobile phase
عشان يمشي عبر الـ stationary phase، الـ mobile phase
هو part of a chromatography system that is mobile
commonly a solvent mixture زي اللي في الـ column
chromatography أو thin layer chromatography or gas
as gas in gas chromatography، الـ mobile phase هو جزء
من أجزاء الـ chromatographic system هما جزءين الـ
stationary و الـ mobile، الـ mobile هو أحد أجزاءه
بيكون عبارة عن solvent عبارة أو ممكن يكون liquid
أو gas، في تجربتنا لليوم، إيش الأدوات اللي بدي
استخدمها؟ بدي استخدم اللي you want أكيد بدي mobile
phase، الـ mobile phase اللي هو اللي you want اللي
بنستخدمه اليوم هو عبارة عن n-butanol مع acetic
acid مع distilled water نسبة خمسة لواحد لخمسة، بحط
خمسة من الـ butanol على واحد من الـ acetic acid على
خمسة من الـ distilled water و أحركهم لمدة عشر دقايق
و بعدين بخليهم يفصلوا لطبقات، باخد الطبقة اللي فوق
و بستخدمها ك اليوان ك mobile phase، بدي developing
solution developing solution هي دي عبارة عن مادة
كيميائية عشان توضح لون المادة المفصولة، اليوم في
تجربتنا بدي اجيب .. بدي نجيب خليط من أحماض أمينية
خليط يحتوي على عدة أنواع من الأحماض الأمينية، بدي
إياه يفصل لمكوناته، لإن بعد ما التقنية تمشي ويفصل
إلى مكوناته بتكون عندي نقاط في كل .. كل مكون بيفصل
في مكان، هذه النقاط،بتكون colorless بتكون غير ملونة
على الورق اللى أنا استخدمتها للفصل، ما بيظهر اللون
فهتكون مش هشوف النقاط وين فصلت، فبدي محلول أو مادة
تظهرلي اللون، بتغير اللون اللى عندي يعني تحولها
تظهرليها بملون، هتكون بألوان تانية، فبدي استخدم مادة
بتحددلي اللون المادة المفصولة، هذه المادة اللي اليوم
نستخدمها اسمها Developing Solution هي عبارة عن
تلاتة من عشرة جرام من الـ ninhydrin على عشرة مل من
الـ butanol على تلاتة مل من الـ acetic acid، المغزاة إنه
أنا بدي أستخدم محلول يظهر لي لون المادة المفصولة
لأنها كانت عبارة عن colorless مالهاش لون فبعد
الفصل مش هعرف وين هي وفصلت وين هي وقفت إلا إذا
لونتها،أنا اليوم بضفص الأحماض الأمينية، تمام؟ الأحماض
الأمينية، أيش الفحص اللي بيستخدم لكشف عن كل
الأحماض الأمينية؟ مع كل الأحماض الأمينية بيعطيني
positive، من الفحصات اللي في أول معملة أخدناها كان
عبارة عن فحص الـ Ninhydrin، الـ Ninhydrin بيعطيني
positive مع الـ Free Alpha Amino Group، حكينا كلهم
عندهم هاي وبيتحول اللون لبربه، مع ذالب رولين عنده
amino group بس بيعطيني برضه لون يلون، يعني المغزاة
هيطلع عندى لون، يعني كلهم هيعطوني لهم فهيتلون و أشوف
وين هاي ال spot و أكفه، إيش كمان بتستخدم؟ بتستخدم
solution of different amino acid، بد الخليط اللي
بيحتوي على عدة مكونات من الأحماض الأمينية، و بدي الـ
chromatography paper اللي هي الـ stationary face و
بدي الـ lotion chamber، الـ chamber اللي هو عبارة عن
زي بيكر، بدي أحط فيه السائل اللي هو عبارة عن الـ الـ
mobile face، السائل هدون بدي أحطه بشامبر بيكر glass
capillary force booting بدي tube، اللي هي الـ
Capillary Tube، القنابيب اللى رفيعة، القنابيب
الشهرية، اظن استخدمتها بالمقدمة، هي القنابيب عشان
تحطلي ال spot، أخد من العينة من الخليط نقطة صغيرة
تحطلي مقدار صغير، الـ drying oven، بدي فرن لتشفيف
على درجة حرارة 60 درجة سيليزيا، هذا الفرن بس عشان
يجفف ويزيد التفاعل بين المواد و الـ Ninhydrin، بيزود
التفاعل المواد مع الـ Ninhydrin، كيف خطوات العمل؟ كيف
أنا بدي أشتغل التجربة؟ هلجيت أن أنا أخد أولا الـ
stationary fast الورقة، تمام، هجيت أنا بحكي لإنه لما
تشتغلي بدك تكوني لابسة gloves و بدك تستخدمي قلم
رصاص في الرسم عليها، رسم خط البداية و خط النهاية،
بدك تستخدمي قلم رصاص، ليش؟ لأنه جلم الحبر لو
استخدمتيه هو عبارة عن أصباغ، عبارة عن ألوان، لما
تيجي تفصليه ممكن تفصل الألوان معاك، اللي هو اللي
موجودة فيه الجلم الحمر، و بدي بس ألبس gloves عشان
أتجنب الـ contamination، ده بعيد عن الـ contamination
ليش؟ لأن جلدي الإنسان عبارة عن حماض أمنية في الجلب
موجودة، فانت لو استخدمت الورقة بيدك من غير gloves
بصمات اسمك اللى بتحتوي على أحماض أمينية بتطبق على
الورقة، ممكن تفصل ويصير عندك وانت مانعش ان يصير
عندك في أحماض أمينية جاية من الإيد من الجل، مش انها
من الخليط تمام؟ الجيتكى بده يشتغل بده يجيب الـ
stationary phase اللى عبارة عن ورقة، علنا اليوم
stationary phase، الورقة هاي بتكون برس متقبة، تمام،
بدي أعمل فيها خط بداية، اللي من عنده بدي أحط الخليط،
بدي أحط نقطة من المادة اللي بدي أفصلها، كيف بده أحط
خط البداية؟ بيحكيلي بنجيس من تحت من أسفل الورقة
لفوق، بنجيس 8 من 10 سانتي، 8 من 10 سانتي من عندها
بحط خط البداية، إذا من تحت لفوق بدي أجيس 8 من 10
سانتي و أرسم خط البداية، من فوق من الـ end line، من
خط النهاية، لوين بده يوصل؟ من فوق بدي أجيس من فوق 5
من 10 سانتي، تمام؟ و بعدين إذا عندي أكتر من خليط بدي
أفصل و أقوى أكتر من المادة بدي أجيس من الطرف من
الخط البداية اللي جيسته من تحت، اللي رسمته من الطرف
بدي أجيس واحد سانتي و أحط أول نقطة، و بعدين واحد
سانتي و أحط النقطة التاني، و واحد سانتي و أحط
النقطة التالتة، فكل نقطة بينها و بين البداية و
بينها و بين الجانبها واحد سانتي، بدي أجيس و أحط
النقطة، أنا هكذا بكون جهزت الورقة أنه من تحت جسد 8
من 10 سانتي و من فوق 5 من 10 سانتي، بعدين على خط
البداية اللي أنا رسمته تحت بدي أجيس من الحفة نص
سانتي و أحط أول واحد، أول مكوّن، بعدين بدي أجيس بينه
وبين التاني واحد سانتي و أحط المكون التاني، و واحد
سانتي و أحط المكون التاني، من على الجدار لأول مكون
بجيس بس نص سانتي، بس بين المكون و التاني بجيس واحد
سانتي، هلجيت الورقة صارت عندي جاهزة زيك و مرسوم
الخط البداية و الخط النهائية و أين بدي أحط كل مكون
بجيب هذا الخليط و بحط على كل مكان، بكون كتب اسمها
مثلا الـ أول مكتشر واحد، مكتشر اتنين، و لو بدي اعمل
بس glycine لحال و cysteine لحال و bruline لحال، بحط
لكل واحدة في مكان من الـ cup بتاعها، خليت الأول باخد
بالـ capillary tube القنبوبة الشعرية و بحط نقطة على
مكانها، الأول، التانية بحط بالـ capillary tube و بحط
نقطة، هلجيت خلصة الورقة الـ stationary phase جاهزة
ومحطوط عليها الخليط، بجيب الـ beaker اللي يحتوي على
الـ mobile phase، وبحطها بغمرها يعني الورقة بغمرها في
الـ mobile phase، الـ stationary phase اللي هي الورقة
بغمرها في الـ mobile phase و بسيبها لحد ما يرتفع
السائل في الـ mobile phase، اللي هو الـ mobile phase
هذا السائل بدي يرتفع عبر الـ stationary phase، بيرتفع
و بيوصل لما يجرب يوصل من خط النهاية بقى أشيل
الورقة من الـ mobile face بشيلها من الـ beacon و
بطلحها بسيبها تجف في الفرن في الـ oven، بعد ما جف
بطلحها، مش هنشوف النقاط مش هنشوف كيف فصل، ليش؟ لأنه
أصلا بتكون colorless المواد اللي فصلت أحمد عمانية
colorless، ماذا أفعل؟ بجيب الـ developing، بعدما جف
بجيب الـ developing solution اللي هو المحلول اللي
بيظهر اللون، بقرشه عبارة عن بخاخ، بقرش منه على
الورقة و بحطها في الفرن الجاف، بعد ما اتجف ويزود
التفاعل، هذا الفرن بين الـ Ninhydrin و المركّب
الحمض الأميني، أطلّحها من الفرن بشوف أنه فصل عندي
على شكل Spot على شكل نقاط ملونة، كل نقطة في مكان
بحسب لكل نقطة الـ retention factor، بدي أجيز المسافة
اللي مشيتها النقطة من خط البداية لأين مشيت على
النقطة اللي مشي على المسافة اللي مشيها المحلول من
البداية للنهاية، اللي مشيها الـ mobile phase من
البداية للنهاية، بصير عندي هيك معروف لكل نقطة الـ
retention factor، برجع للجدول، هي في عندنا جدول
بالاخر بيوضح أنه كل حمض أميني جديش إيه الـ
retention factor، أنا بكون حسبت الـ retention factor
على فرض طلع معاهي 55%، باجي على هذا الجدول 55% من
هو الحمض الأميني الـ tryptophan، إذا هذا هو الـ
tryptophan، مثلا طلعت معاهي 5 من 100، من هذا بيطلع الـ
arginine، وهكذا، هذه التقنية ككل بيكر انها يحتوي على
الـ mobile phase، الـ solvent تحت، وهذا العمود هو
عبارة عن الـ stationary phase، بعد ما احط عليها
الخليط، بغمرها في داخل الـ mobile phase و بيبدأ يمر
الساقل عبرها، لما يصل خط النهائي بطلحها
Determination of amino acid using thin layer
chromatography، أنا بدي استخدم a thin layer
chromatography في هذا المعمل عشان افصل الأحماض
الأمنية، خليط من أحماض أمنية، طيب حكينا الأحماض
الأمنية colorless، كيف بديك تتعرفي عليها؟ بيحكي اللي
بنتعرف عليها باستخدام حاجات عدة مكونات Developing
solution، سميناها Developing solution، هاي عبارة عن
مادة بتلون الأشياء، فبقدر أعرف بتلونها و بتخليها
ملونة و بعرف ما كانت اش، ممكن استخدم اشهر اشي ممكن
استخدم مع الـ amino acid هي الـ Ninhydrin Spray، برش
من Ninhydrin، بختار بيستخدم كـ visualizing agent، عمل
مكشف بقدر اكتشف منه الأحمد الأمينية، انه بلونها
حكينا اللي هو مبدأ عمل الـ Ninhydrin، انه بيتكون عند
رومانس كمبليكس لونه بيربو، ممكن استخدم iodine vapor
as indicator، انه باروش من الـ iodine و هو بيستخدم كـ