بسم الله الرحمن الرحيم موضوعنا اليوم فحص
Hemoglobin A2 Hemoglobin
A2 من الـ Hemoglobin اللي موجود بشكل Normal في
الـ Adult طبعا هو بتكون من 2 Alpha و 2 Delta تش
يعني Hemoglobin A2 بشكل عند الشخص الـ Normal من 1.8
من 1.8 إلى 3.5 ممكن يرتفع Hemoglobin A2 Hemoglobin
A2 لو لاحظته لا يحتوي على الـBeta-Chain فعادة لو
كان في خلل في Beta-Chain عند المريض راح نلاقي أنه
هيرتفع Hemoglobin A2 من باب تعويض الخلل الموجود
لأن مافيش فيه Beta-Chain زي ما قلنا فمن الحالات
الـBeta-thalassemia-3 و الـHomozygous-thalassemia
هذه حالات ممكن يرتفع فيها Hemoglobin A2 أما بينقص
في حالات Iron deficiency anemia في حالة Hemoglobin
H Disease في حالة Hereditary Persistence of
Hemoglobin F إيش يعني Hereditary Persistence of
Hemoglobin F؟ هدول ناس بيضل Hemoglobin F يتصنع
عندهم حتى لما بيكبروا يعني إحنا عارفين إن
Hemoglobin F بيصير له switch off عند 6 شهور بيبطل
يتصنع أو بتصنع بكمية ضئيلة جدا وبيصير اللي يتصنع
Hemoglobin A لكن فيه جماعة من الناس بيظل عندهم
Hemoglobin F موجود بمسبة ممكن توصل 40% من الـ
Total Hemoglobin اللي عندهم هذه الحالة بيسموها
Hereditary Resistance of Hemoglobin F كيف بتصير؟
إنه ما بيصير switch off لتصنيع Hemoglobin F بشكل
كامل فبيظل يتصنع على مدى الحياة حالة الـ
Fibroplastic Anemia حالة فحص مقلبن A2 بيعتمد على
principle تسمى بالـ Ion Exchange Chromatography
الـ Ion Exchange Chromatography حقيقة في منها
نوعين نوع يسمى Anion Exchange Chromatography ونوع
يسمى Cation Exchange Chromatography وهذه الطريقة
جيدة ويعني بتعطي نتائج ممتازة لهيمoglobin A2 ماشي
الفرق بين الـ Anion Exchange والـ Cation Exchange
هي الفكرة بتعتمد على وجود حبيبات تسمى بالرزن هذه
الحبيبات تكون مشحونة إما بشحنة سالبة أو بشحنة
موجبة الآن إذا كانت مشحونة بشحنة موجبة هتستقطب
الشحنات السالبة حولها ويسمى هذا بالـ Anion
Exchange Chromatography إذا كانت مشحونة بشحنة
سالبة ستستقطب الشحنات الموجبة ويسمى الـ Cation
Exchange Chromatography المُغلب من أيه؟ خلينا نشوف
إيش هي الـ Principle للـ Ion Exchange
Chromatography طبعا زي ما قلنا في عندنا أنيون وفي
عندنا كتايون أنا هحكي عن الانيون الكلام نفسه
بينطبق على الكتايون بس يعني الشحنات بالعكس بتكون
طيب، الآن أول حاجة بعملها بحضر
Hemolysate من الـ Blood الـ Hemolysate الهدف منه
أني أطلّع الـ Hemoglobin الموجود بداخل الخلايا
وباجي بحطه في الـ Column طب إيش هو الـ Column؟ الـ
Column زي ما انتوا شايفين Column صغير بيكون فيه
فتحة علوية أحط من خلالها العينة بتاعتى أو في من
تحت برضه فتحة صغيرة هادى بتعمل ترشيح للثائل أو
بنزل من خلالها الثائل الآن في داخل ال Column عندي
مركب بيسموه «Diecyl Aminoacyl Resin» هو عبارة عن
مركب سيليوزي ال particles بتاعته كبيرة بحيث انه هذه
الـ particles فيه هنا filter بمنع نزولها يعني ال
particles هذه لأنها كبيرة هتظل في قلب ال column مش
هتنزل خلال عملية تجميع السوائل، تمام؟ إذن، خلاصة
الكلام، في عندي رزن، الرزن هذا شحناته موجبة، كويس؟
طيب، أنا بحط الهيمولايزات اللي حضرته على الرزن هذا
و بكمل الخطوات ابتعد، خليني أشوف الآن لما بضيف الـ
Hemolysate على الرزن الـ Hemolysate عبارة عن أنواع
من الـ Hemoglobin أنا بضبط الـ Buffer BH بحيث أنه
بتعطيني .. بتعطي الـ Hemoglobin شحنات سالبة تمام؟
بتعطي الـ Hemoglobin شحنات سالبة طبعاً شحنات الـ
Hemoglobin السالبة هتخلي يرتبط مع مين؟ مع الرزن
كويس؟ طيب هلقيت؟ الـ Hemoglobin اللي ارتبط مع الرزن
مش هيقدر ينزل من عبر عملية تجميع السائل من عبر
الفتحة هذه صح ولا لأ؟ مين اللي بينزل؟ الـ
Hemoglobin اللي مارتبطش الآن في هذه الطريقة الـ pH
تعطي الـ Buffer بتعمل شغلة مهمة كتير إنه بتعطي كل
أنواع الـ Hemoglobin شحنة سالبة قوية بحيث إنه كل
أنواع الـ Hemoglobin ترتبط مع الرزن ولا تنزل خلال
عملية تجميع السائل أو خلال عملية الـ filtration ما
عدا Hemoglobin A2 Hemoglobin A2 بتكون شحنته
سالبة ضعيفة جدا فلا يرتبط لزيئات الرزن وبالتالي
بسهولة ممكن أنا السائل اللي بنزل هيكون محامل معاه
فقط الـ Hemoglobin اللي مرتبطش اللي هو من
Hemoglobin A2 إذن in this procedure Hemoglobin A2
originally bound to the resin is released from the
resin and eluted by the developer and it passes
through the column إذن Hemoglobin A2 هينزل لأنه هو
الوحيد اللي مش راح يقدر يرتبط عشان شحنته السالبة
بتكون ضعيفة فبصير عندى في الـ Cube Ash Hemoglobin
A2 الآن
most other normal and abnormal hemoglobins remain
bound to the resin بقيت أنواع الهمoglobin هتظل
مرتبطة بالرزن الـ eluted hemoglobin A2 is then
measured spectrophotometrically and compared with
the amount of total hemoglobin in the specimen to
calculate the percent of hemoglobin A2 يعني باخد
الـ Absorbance لهيمoglobin A2 وبناخد قراقة للـ
Total Hemoglobin عشان أنا مطلوب إني أحسب النسبة
المئوية لهيمoglobin A2 بالنسبة للـ Total
Hemoglobin طبعا طريقة الشغل يعني مبلش نحكيها هلقات
بس هي كفكرة بتشمل تلت مراحل المرحلة الأولى
Hemolysate Preparation في طريقة معينة بكسر فيها
الـRBCs الثانية أني بدي أفصل Hemoglobin A2 أكيد هحط
الـ Hemolysate في الرزم و أحط buffer عشان ال
buffer هو نازل خلال ال filtration ياخد معاه
Hemoglobin A2 وأقرأ اللي بيطلع على 415 نانومتر بعد
هيك في عندى الـ Total Hemoglobin زي ما قلتلكم بدنا
نعمل قياس للـ Total Hemoglobin عشان أجيب نسبة
Hemoglobin A2 بالنسبة للـ Total Hemoglobin بحضر
الـ Total Hemoglobin بطريقة معينة وبجيب ال
absorbance إليه بعد هيك بدرب اللي هو نسبة
Hemoglobin A2 هتطلع عندى ال absorbance لـ
Hemoglobin A2 على ال absorbance للـ Total هنا في
25 هو في الواقع يبقى نتهدي الـ 25 جاية من وينهو
الأصل أنا بدي أجيب نسبة مئوية فبدي أضرب في مية صح؟
Absorbance للـ A2 على Absorbance للـ Total في 100%
لكن هناك فرق في التخفيفات يعني بالنسبة لـ
Hemoglobin A2 عشان أقارنه بالـ Total يكون مر بنفس
التخفيف اللي مر فيه Total لكن لأن هناك فرق في
التخفيفات ففي عندي المية بقسمها على 4 عشان تطلع
نتيجتي صحيحة تمام؟ وبحسب النسبة المئوية لـ
Hemoglobin A2 الـ Expected Values اللي هي مجلوب من
A2 الـ Control طبعاً بيكون Normal من 1.8 إلى 3.2
من 10 الهيتيروزايجس بيتا ثلاثيمية 3.2 إلى 5
هوموزايجس بيتا ثلاثيمية طيب، هنشوف بعض الملاحظات
أول حاجة الفحص أنا مش لازم أعمله قبل ما يصير عمر
الطفل 6 شهور لأنه قبل 6 شهور زي ما أحنا عارفين
بيبقى في عندي نسبة عالية من Hemoglobin F وما بقدر
أقرر نسب الـ Hemoglobin لهذا الشخص if the patient
has erogas for beta-thalassemia also had iron
deficiency anemia the hemoglobin A2 may be within
the normal range، هذه النقطة كتير مهمة هلقيت البنات
في عندي يعني فحص الـ Hemoglobin A2 كتير مهم في
الفصل ما بين الناس الحاملة للـ Beta-thalassemia و
الناس اللي عندها Iron deficiency anemia هلقيت اللي
عندهم Beta-thalassemia ال career بيبقى عندهم
Hemoglobin A2 مرتفع بينما الناس اللي عندهم Iron
deficiency anemia بينخفض Hemoglobin A2 وهذه يعني من
الحاجات اللي احنا بنستخدمها عشان نعمل diagnosis أو
نفصل ما بين الـ Beta-thalassemia وما بين الـ Iron
deficiency anemia طيب، هلقيت في واحد، في شخص مثلا،
بيكون حامل للـ Beta-thalassemia لكن بعد فترة معينة
من العمر اتكون عنده نقص حديد وصار عنده Iron
deficiency anemia يعني صار عنده التنتان الـ beta
-thalassemia هترفع الـ hemoglobin A2 والـ iron
deficiency أنيميا هتنقص الـ hemoglobin A2 فهذا
هينتج عنه hemoglobin A2 normal فأنا عشان أعمل
تشخيص صحيح في هذه الحالة أو أنا لو كنت شاكة بحالة
من هذا النوع بعالج الحاجة اللي بتتعالج مش الحاجة
اللي بتتعالج طبعا الـ thalassemia مابتتعالج لأنه
خلال وراسي خلال جيني بعالج الـ iron deficiency
أنيميا فممكن أنا أعطي المريضعلاج لـ Iron
deficiency anemia باعطيه حديد فترة معينة بعد أربع
شهور باجي بعمل Hemoglobin A2 كمان مرة بلاقي أن
الوضع صار أصدقاء كيف يعني؟ هلاقيت أنا كانت عندي
أساسا Hemoglobin A2 مرتفعة لكن كون ارتفعت يعني أجت
لحقت بحالة الثلاثيميا حالة Iron deficiency anemia
كان نزل ال Hemoglobin A2 تمام؟ فصرت أنا جيت للشخص
لقيت الـ Hemoglobin A2 Normal لكن أنا لازم اتشاك
أنه عنده Beta Thalassemia فبروح بشوف الـ Iron
Profile فحصات الحديد حلاقي عنده نقص في الحديد بروح
بعطيه حديد بعالج الـ Iron Deficiency Anemia بستنق
كل الخلايا اللي فيها Iron Deficiency انها تنتهي
قداش بدها من 3 شهور إلى 4 شهور اللي هو عمر الـ
RBCs عشان يتصنع خلايا جديدة مافيش فيها Iron
Deficiency بعد الأربع شهور بروح دقيس Hemoglobin A2
هلأ بعد مباقية الـ Hemoglobin A2 هيكون هنا اتعدل
بفعل تعديل الحديد فإذا كان فعلا هذا الشخص عنده
Beta-thalassemia بعد علاج الحديد ملاقي الـ
Hemoglobin A2 ارتفع، تمام؟ الشغل التاني إذا كان
المريض بياخد نقل دم أو ما أخد نقل دم مش لازم أعمله
هذا الفحص لأنه بنقل الدم هيكون عنده دم مش الدم
الخاص فيه فبالتالي هلاقي نتيجة الـ Hemoglobin اتوا
مش صحيحة some of the abnormal hemoglobin زي
Hemoglobin S وC وO وE وG hybrid ممكن تتدخل في نتيجة
الـ Hemoglobin A2 في هذه الطريقة «الوجود
للهمoglobin غير عادل يجب أن يتم اكتشاف بشكل
إلكتروفوريسي» «Hemoglobin F لا يتعاني من هذه
الطريقة» يعني في بعض أنواع الـ Hemoglobin ممكن
تتدخل في النتيجة وتعطيني نتيجة خاطئة لكن فبالتالي
أنا بدي أعمل confirmation لوجودها أو عدمه عن طريق
الـ Electrophoresis «Hemoglobin F لا يتعاني من هذه 176 00:12:17,380 -->